Pemeriksaan Mikroskopis Malaria
1.
Pemeriksaan
darah malaria dengan mikroskopis
a. Pengambilan
darah kapiler
1) Alat
dan bahan
2) Kapas
alkohol 70%
3) Objek
glass
4) Box
Slide
5) Pensil
(untuk memberikan label pada slide)
6) Lanset
steril untuk mengambil darah kapiler
b. Penyiapan
kaca sediaan
1) Kaca
sediaan harus bersih, tidak berdebu, tidak berlemak, tidak mengandung alkohol,
jernih tidak kusam, ketebaan 1,1-1,3 mm.
2) Kaca
sediaan yang baru, dapat dicuci dengan sabun cair.
3) Dikeringkan
dan diberi label.
c. Pengambilan
dan pembuatan sediaan darah kapiler
1) Tulis
: nomor subjek, inisial nama, tanggal dan hari kunjungan pada slide
2) Pegang
jari manis tangan kiri pasien, bersihkan ujung jari tersebut dengan kapas alkohol,
gosok sampai bersih dan keringkan dengan kapas kering.
3) Dengan
menggunakan lanset, tusuk ujung jari dibagian pinggir (kulit lebih tipis)
dengan cepat.
4) Bersihkan
tetes darah pertama dengan kapas kering.
5) Ambil
slide yang sudah diberi label dan teteskan darah sebanyak 3 tetes untuk sediaan
darah tebal (<6µl) dan 1 tetes kecil untuk sediaan darah tipis (<2µl).
6) Gunakan
slide bersih sebagai pendorong untuk membuat hapusan darah tipis dan untuk
mengaduk 3 tetes darah tebal.
7) Letakkan
slide diatas permukaan yang rata dan kering. Biarkan darah kering diudara
(untuk mempercepat boleh digunakan kipas angin, tidak dengan api atau dijemur
dibawah sinar matahari). Lindunggi slide yang sudah kering dari lalat dan debu.
2.
Pewarnaan
slide untuk mikroskopis malaria
a. Alat
dan bahan
1) Rak
pewarnaan
2) Pipet
3) Giemsa
stock
4) Metanol
absolut
5) Air
mineral pH 7,2
b. Langkah-langkah
fiksasi dan pewarnaan.
1) Pastikan
sediaan telah kering dengan sempurna.
2) Sediaan
darah tipis harus difiksasi dengan methanol absolut terlebih dahulu sebelum
diwarnai. Posisi slide agak miring saat meneteskan methanol atau slide
dicelupkan dalam methanol sebentar saja (1-2 detik) dengan posisi darah tipis
dibawah, karena methanol tidak boleh mengenai darah tebal (mengganggu
dehemoglobinisasi sediaan darah tebal)
3) Biarkan
darah tipis kering dari methanol ±1 menit.
4) Siapkan
cairan Giemsa yang telah dibuat dengan pengenceran 3%.
5) Letakkan
slide di rak pewarnaan dan teteskan cairan Giemsa menggunakan pipet sampai
seluruh sediaan darah tergenangi cat.
6) Didiamkan
selama 45-60 menit.
7) Bilas
perlahan dan hati-hati dengan air bersih.
8) Biarkan
slide menggering dengan posisi berdiri.
c. Pembuatan
campuran untuk pembuatan giemsa
Pengenceran yang
digunakan yaitu 3% yaitu 0,3 ml stock giemsa tambahkan dengan 9,7 ml aquadest,
dan dapat digunakan selama 1 jam.
d. Pembacaan
slide malaria
1) Alat
dan bahan
a) Mikroskop
dengan pembesaran objektif 100x dan lensa okuler 10x
b) Minyak
imersi
c) Alat
hitung parasit
d) Tissue
2) Pembacaan
sediaan darah
a) Darah
tebal untuk menghitung parasit minimal per 200 lekosit, bila ditemukan parasit
kurang dari 10 darah dalam 200 lekosit maka dihitung per 500 leukosit.
b) Darah
tipis untuk konfirmasi diagnosa spesies atau untuk mendapat gambaran mengenai
morfologi parasit. Darah tipis juga digunakan untuk menghitung parasit minimal
dalam 100 eritrosit.
c) Parasit
seksual / gametosit dihitung dalam 2000 leukosit.
d) Selesai
membaca slide diletakkan terbalik pada tissue, agar minyak imersi terserap
tissue. Slide dapat disimpan pada box slide.
3. Cara
perhitungan
Jumlah
parasit x 5000 (leukosit) = parasit/µl
darah
200
leukosit
Jumlah parasit x 5000 (leukosit)
= parasit/ul
darah
500
Leukosit
Jumlah
gametsit x 5000 (leukosit) = parasit/µl
darah
2000
leukosit
Jika menghitung dari
hapusan darah tipis
Jumlah parasit x 4,5
juta(eritrosit) = parasit/µl
darah
1000
erytrosit
Catatan :
1. Parasit
dihitung per 500 leukosit, jika dalam 200 leukosit ditemukan kurang dari 10
parasit.
2. Parasit
dihitung pada hapusan darah tipis minimal 1000 erytrosit, jika pada hapusan
darah tebal dalam 200 leukosit ditemukan ≥500 parasit
3. Catat
jumlah parasit seksual (gametosit) minimal per 2.000 leukosit.
